您好!歡迎訪問和元李記(上海)生物技術有限公司網站!
咨詢熱線

18201805506

當前位置:首頁 > 技術文章 > 高保真DNA聚合酶的操作方法介紹

高保真DNA聚合酶的操作方法介紹

更新時間:2023-03-09      點擊次數:678
  高保真DNA聚合酶是一種具有高準確性和高速度的酶,廣泛應用于PCR擴增、突變篩選、基因克隆、DNA測序等領域。其在基因工程和生物技術研究中有著十分重要的作用。
  作用原理:高保真DNA聚合酶可將DNA單鏈合成DNA雙鏈,并對DNA進行擴增。該酶的作用機理基于DNA聚合酶基本的催化反應機制:利用DNA單鏈為模板,在DNA聚合酶的作用下,引物與模板互補結合進行DNA聚合反應。高保真DNA聚合酶的主要特點是:具有一定的3’-5’外切活性,能修正因PCR擴增引入的多種誤差,如插入、缺失、錯配等;具有高度準確性,錯誤率極低(10-7-10-10);能長時間持續擴增反應,具有良好的穩定性。
  操作方法:高保真DNA聚合酶的操作方法大致分為PCR擴增、突變篩選和基因克隆等步驟。
  1、PCR擴增:將模板DNA、引物、dNTP、緩沖液、高保真DNA聚合酶等反應組分混合,進行不斷循環變溫PCR擴增反應,即可擴增出目標DNA。在反應過程中,應避免DNA聚合酶與其他反應組分的污染,控制反應溫度和時間,并根據反應結果進行后續實驗操作。
  2、突變篩選:高保真DNA聚合酶可利用其3’-5’外切活性修正Ab拷貝酶的不配對,使其通過突變篩選后得到正確的組合,從而從大量試驗基質中快速篩選出突變體。突變篩選方法一般是利用比較高效的突變誘導劑處理,通過后續的PCR擴增驗證篩選得到的突變體。
  3、基因克?。夯蚩寺〕3P枰獦嫿◣в幸欢ㄏ拗菩詢惹忻盖形稽c的載體,因此在擴增目標DNA的同時要進行相關的酶切和連接操作。具體步驟為:首先將DNA金黃色葡萄球菌酶進行擴增,然后進行限制性內切酶切割,再利用DNA連接酶將其連接到載體上,最后在大腸桿菌等細菌中進行轉化和篩選。
掃一掃,關注微信
地址:上海市浦東新區紫萍路908弄 傳真:021-50724961
©2024 和元李記(上海)生物技術有限公司 版權所有 All Rights Reserved.  備案號:滬ICP備2023007219號-1
久久66热偷产精品|亚洲1擦菊综合网|18欧美 亚洲 精品|最新亚洲中文字幕 被公侵犯肉体中文字幕无码 新无码国产在线视频2021 国产成人精品综合久久久 国产成人A区在线 国产精品久久久无码小草 亚洲色中文字幕在线 中文字幕人妻丝袜乱一区三区 A级毛片成人网站 被同学丝袜人妻李若雪王飞